乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術(shù) 文章
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乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒
商品貨號:QS1001
英文名稱:Lacate Dehydrogenase(LDH)Assay Kit
別名:乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒
檢測方法:常量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
QS1001-50管/24樣 | 50管/24樣 | ¥170.00元 |
- 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
- 產(chǎn)品說明書
測定意義:
LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理:
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
貨號:QS1001 規(guī)格:50管/24樣
乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒說明書
分光光度法
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理:
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;
試劑一:液體15 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 ℃保存,可保存兩周,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:液體15 mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
操作步驟:
一、樣品測定的準(zhǔn)備:
- 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500-1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
- 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5-10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
- 血清(漿)樣品:直接檢測。
二、測定操作:
- 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。
- 樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 250 | 250 |
試劑二 | 50 |
|
蒸餾水 |
| 50 |
充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min
試劑三 | 250 | 250 |
充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min
試劑四 | 750 | 750 |
充分混勻,室溫靜置3min,450 nm下測定吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。
LDH活力單位計算:
- 標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.725x (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/mL;y為對吸光度)。
- 血清(漿)LDH活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(U/mL)=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA
- 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計算
- 按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(U/mg prot)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
- 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(U/g鮮重)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W
- 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(U/104 cell)= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W
V1:加入反應(yīng)體系中樣本的體積,0.05 mL;V2:加入提取液的體積,1 mL; T:反應(yīng)時間,15 min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。
輔酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
QS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
MS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 可見分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS1005 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
MS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
QS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
MS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |