NADH氧化酶(NOX)測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術 文章
NADH氧化酶(NADH Oxidase,NOX)試劑盒
商品貨號:QS1004
英文名稱:NADH Oxidase(NOX) Assay Kit
別名:NADH氧化酶試劑盒 NOX Kit NADH氧化酶(NOX)試劑盒 NADH氧化酶(NOX)測試盒
檢測方法:常量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
QS1004-50管/48樣 | 50管/48樣 | ¥450.00元 |
測定意義:
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應密切相關。
測定原理:
NOX能夠將NADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍色的DCPIP被還原為無色的DCPIP,在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。
貨號:QS1004 規(guī)格:50管/48樣
NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)試劑盒說明書
可見分光光度法
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應密切相關。
測定原理:
NOX能夠將NADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍色的DCPIP被還原為無色的DCPIP,在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。
自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,-20℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,-20℃保存。
試劑三:液體1mL×1瓶,-20℃保存。
試劑四:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:液體6 mL×1瓶,4℃保存。
試劑六:粉劑×2瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入5mL蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃
保存,禁止反復凍融。
樣本的前處理:
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
- 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 將勻漿600g,4℃離心5min。
- 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
- 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的NOX(此步可選做)。
- 步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復30次),用于NOX活性測定。
血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
- 分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至600nm,蒸餾水調零。
- 樣本測定
(1)試劑四、試劑五和試劑六于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)在1mL石英比色皿中加入40μL樣本、700μL試劑四、100μL試劑五和160μL試劑六,混勻,記錄600nm處20s時吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。
NOX活力單位的計算:
1、血清(漿)NOX活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個酶活力單位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=2500×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NOX活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個酶活力單位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個酶活力單位。
NOX(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個酶活力單位。
NOX(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V反總:反應體系總體積,1mL; V樣:加入樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量;500:細胞或細菌總數(shù),500萬。
輔酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
QS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
MS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 可見分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS1005 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
MS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
QS1011 | 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
MS1011 | 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |