醇脫氫酶(ADH)測試盒 微量酶標(biāo)儀法 說明 技術(shù)文章
乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒
商品貨號:MS1007
英文名稱:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
別名:乙醇脫氫酶試劑盒 ADH Kit 乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒
檢測方法:微量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
MS1007-100管/96樣 | 索橋生物 | 100管/96樣 | ¥550.00元 |
測定意義:
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
測定原理:
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計(jì)算ADH活性。
貨號:MS1007 規(guī)格:100管/96樣
乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒說明書
微量法
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
測定原理:
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計(jì)算ADH活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中,4℃保存。
試劑三:粉劑×1支,-20℃保存。
試劑四:液體×1支,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
- 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
- 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
ADH測定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸餾水、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。
4. 測定管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意:空白管只需測定一次。
計(jì)算公式:
a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管) ÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/g 鮮重) =[(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管) ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/mL) = [(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管)
ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。
b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管) ÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/g 鮮重) =[(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管) ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (μmol/min/mL) = [(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T
=1.61×(△A測定管–△A空白管)
ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。
注意事項(xiàng):
- 上清液蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
- 配制好的試劑二3天使用完。
輔酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
QS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
MS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 可見分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS1005 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
MS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
QS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
MS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |