乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒 說(shuō)明 技術(shù)文章
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乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase,AchE)試劑盒
商品貨號(hào):QS2000
英文名稱(chēng):Acetylcholinesterase(AchE) Assay Kit
別名:乙酰膽堿酯酶試劑盒 AchE Kit 乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒 乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)試盒
檢測(cè)方法:常量法
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
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QS2000-50管/48樣 | 索橋生物 | 50管/48樣 | ¥200.00元 |
- 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
- 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
測(cè)定意義:
AchE屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿(Ach)水解,在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
測(cè)定原理:
AchE催化Ach水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm處有吸收峰,通過(guò)測(cè)定412 nm吸光度增加速率,計(jì)算AchE活性。
貨號(hào): QS2000 規(guī)格:50管/48樣
乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AchE)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
AchE 屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE 催化乙酰膽堿(Ach) 水解,在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
測(cè)定原理:
AchE 催化 Ach 水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成 5-巰基-硝基苯 甲酸(TNB);TNB 在 412nm 處有吸收峰,通過(guò)測(cè)定 412 nm 吸光度增加速率,計(jì)算 AchE 活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 2.6mL 試劑一,充分震蕩溶解。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 2.6mL 試劑一,充分震蕩溶解。
粗酶液提取:
1. 組織:
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加 入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心 10min,取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:
按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí) 間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接測(cè)定。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 412 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30min。
3. 取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100μ L 上清液、800 μ L 試劑一、50μ L 試劑二和 50 μ L 試 劑三,迅速混勻,于 412nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化,第 10s 吸光值記為 A1,第 190s 吸光 值記為 A2。△A 測(cè)定管=A2-A1。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
AchE 活性計(jì)算公式:
1. 組織 AchE 活性
(1)按照蛋白濃度計(jì)算 活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷(Cpr ×V 樣)÷T = 245×△A÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。
AchE 酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T = 245×△A÷W
2. 細(xì)菌、細(xì)胞 AchE 活性
活性單位定義:每 104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。
AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T = 245×△A÷細(xì)胞數(shù)量
3. 血清 AchE 活性
活性單位定義:每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。
AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε ÷d×V 反總×109 )÷V 樣÷T =245×△A
ε :TNB 摩爾消光系數(shù),13.6×103 L/mol/cm;V 反總:反應(yīng)體系總體積(L),1 mL=0.001 L; 106:1mol=1×106 μ mol;V 樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);W:樣本 質(zhì)量,g;V 樣:加入上清液體積(mL),0.1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),3 min。
系列產(chǎn)品及單價(jià)
酯酶系列 | ||||
QS2000 | 乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 200 |
MS2000 | 乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 380 |
QS2001 | 組織及血液酸性磷酸酶(ACP)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 160 |
MS2001 | 酸性磷酸酶(ACP)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 310 |
QS2002 | 組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 160 |
MS2002 | 堿性磷酸酶(AKP/ALP)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 310 |
QS2003 | 羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 300 |
MS2003 | 羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 590 |