TEV重組型蛋白酶相關(guān)小知識

　　和因子Xa、凝血酶相比，TEV酶是識別序列更加嚴(yán)格。做為生物工程下游技術(shù)中融合蛋白酶切使用的重要工具酶，TEV酶識別非常一致的7氨基酸序列：E-Xaa-Xaa-Y-Xaa-Q-P1’(G/S)，酶切發(fā)生在Q和P1’之間的肽鍵。常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸，這樣目標(biāo)蛋白從融合蛋白的N端釋放，帶自然的N末端或者只多一個(gè)氨基酸的蛋白。該產(chǎn)品是經(jīng)過了基因工程改造的蛋白酶，穩(wěn)定性好，在廣泛的溫度范圍具有特異性。本品來源于重組大腸桿菌，經(jīng)過高度純化，比活性達(dá)到10,000U/mg。最適酶切溫度是30℃，但在4℃也具有酶活性。rTEV-H帶His標(biāo)簽，酶切后可方便地通過谷胱甘肽親和柱層析去除。酶切的條件比如：溫度、pH、DTT等可根據(jù)具體蛋白進(jìn)行優(yōu)化。

　　活性單位：

　　一個(gè)酶活性單位定義為在4℃，pH8.0條件下，12~16小時(shí)在酶切反應(yīng)緩沖液中將5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。