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Western Blot雜交膜轉(zhuǎn)印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區(qū)別

更新時間:2012-02-01  |  點擊率:11490
雜交膜轉(zhuǎn)印膜*纖維素膜NC與PVDF膜的區(qū)別
      雜交膜轉(zhuǎn)印膜*纖維素膜NC與PVDF膜的區(qū)別
1. *纖維素膜
*纖維素膜是蛋白印跡廣泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì),對蛋白有很強的結(jié)合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學(xué)發(fā)光(Luminol類)、常規(guī)顯色、染色熒光顯色;背景低,信噪比高。NC的使用也很簡便,比如不需要甲醛預(yù)處理,只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC很容易封閉,也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,又容易卷,操作要小心,不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途--因為經(jīng)不起多次“折磨”。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜,小于20KD的話建議選擇0.2um的,如果小于7KD的話好選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC--混有含醋酸纖維(CM)的NC結(jié)合力會有所降低。另外提醒一句:由于NC上結(jié)合的蛋白會因為一些去污劑而被代替,因此在封閉時好使用較溫的Tween20,而且濃度不要超過0.3%(據(jù)說0.05%效果好)。一般而言,NC越純,其蛋白結(jié)合能力就越高,所以要增加WB的靈敏度分辨率,提高所使用膜的純度是個可以考慮的選擇。如果NC攙雜一些醋化纖維素--這在前面已經(jīng)提到,會影響蛋白質(zhì)結(jié)合。Protran由于是純NC,比較脆,機械耐受力欠佳,需要小心操作,如果擔(dān)心自己“粗手粗腳”,那么就可以考慮一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著稱的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是實惠的選擇,只不過要自己動手裁剪--切記,必須帶手套操作。
*纖維素膜生產(chǎn)商:
GE WHATMAN BA83 BA85  價格  1950.00/卷  有現(xiàn)貨
WHATMAN轉(zhuǎn)印跡膜轉(zhuǎn)印膜10401396 10401196WHATMAN*纖維素膜(NC膜)轉(zhuǎn)印跡膜轉(zhuǎn)印膜10401396 10401196其它的*纖維素雜交膜可能含有大量的醋酸纖維素,這會降低蛋白的結(jié)合能力。Protran雜交膜采用純*纖維素制成,具有好的操作強度,兼容多種檢測方法,包括同位素法,化學(xué)發(fā)光法(以luminol為基礎(chǔ)),比色法和熒光法等。

與PVDF膜相比,Protran*纖維素膜在使用中不需要甲醇預(yù)濕步驟,這使它可以用于那些需要親水性環(huán)境的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移,在轉(zhuǎn)移之前,膜僅需要在水中簡單潤濕,然后置于轉(zhuǎn)移緩沖液中,而不再需要其它預(yù)濕步驟。
 

高結(jié)合力,低背景
除了具有高結(jié)合能力以外,Protran*纖維素膜本身產(chǎn)生的背景非常低,膜*的表面性質(zhì)保證了優(yōu)異的信噪比,而同時卻不需要嚴(yán)格的清洗條件。

小分子蛋白的高保留率
Protran*纖維素膜有多種孔徑大小可供選擇,使不同的應(yīng)用都可以獲得佳的效果。0.2μm孔徑的Protran BA83*纖維素膜通過減少小分子“下漏”來保留分子量小于20KD的蛋白質(zhì)分子。0.45μm孔徑的Protran BA85*纖維素膜是較大分子量樣品和常規(guī)核酸研究的理想選擇。0.1μm孔徑的Protran BA79則用于分子量低于7kD的小分子蛋白轉(zhuǎn)移。
 

Protran*纖維素膜的一個主要優(yōu)勢在于,經(jīng)實驗證明,結(jié)合在Protran膜上的蛋白能夠保持分子識別活性長達(dá)5年。
 

Protran雜交三明治組合
由1張預(yù)切的*纖維素膜和2張3MM層析雜交紙組成的三明治包裝,幫您節(jié)省更多的時間。這些膜都是用于雜交的質(zhì)量好的NC膜——Protran BA83或者BA85。

Protran *纖維素膜的結(jié)合能力為80~150µg/cm2,可高壓滅菌(液體冷循環(huán))

GE RPN303C
PALL 66485 常用的NC膜 30cm*3m/卷超低*:1250.00/卷現(xiàn)貨
 
2. PVDF
與*纖維素膜相比,PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力,機械強度化學(xué)相容性上都更*的性能。市售*纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2(而結(jié)合強度PVDF比硝纖膜強6倍!)。但是PVDF膜大的優(yōu)點不僅于此:更好的機械強度化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,特別是需要做N端蛋白測序,在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下,當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇。但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡,才能用,而且適用過程中萬一干了也要同樣程序再處理(不過要真出現(xiàn)這種問題也是自己欠扁,誰要你不小心呢,轉(zhuǎn)膜前處理也就罷了,轉(zhuǎn)膜后再這樣處理可能會影響后繼的抗體識別呢)。PVDF膜同樣分0.45um0.2um的,后者孔徑小,對小分子蛋白有較好的攔截吸附,背景可能會比前者稍高。
pvdf膜生產(chǎn)商:
MILLIPORE * 常年 現(xiàn)貨
IPVH00010  0.45um  1650.00/卷
ISEQ00010  0.22um   2050.00/卷
 
PALL 66543      2150.00/卷
 
卷膜經(jīng)濟(jì)實惠,裁剪剩下的邊角料還可以用來做點雜交。再次強調(diào)的是,疏水PVDF膜在用前必須經(jīng)過50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘,待膜變成半透明后用純水漂洗一下,轉(zhuǎn)入電泳緩沖液平衡才能用

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