大鼠卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(LCAT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
更新時間:2012-07-26 | 點擊率:2061
大鼠卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:大鼠卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(LCAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)
含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(LCAT)水平。用
純化的大鼠卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(LCAT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗
的微孔中依次加入卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT),再與HRP 標記的卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)
移酶(LCAT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯
色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺
和樣品中的卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸
光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(LCAT)濃度。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品(360U/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標
準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為240 U/L,160 U/L ,80 U/L,40 U/L, 20U/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣
2
品終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好
控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
檢測范圍:
10U/L -300 U/L
規(guī)格:
96 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月