瑞氏染液的作用與應(yīng)用
瑞氏染液的作用與應(yīng)用
瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料,溶于甲醇,后解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。伊紅通常為鈉鹽,有色部分為陰離子。美藍(lán)通常為氯鹽,有色部分為陽離子。甲醇的作用:一是溶解美藍(lán)和伊紅,使其解離為有色美藍(lán)正離子的和伊紅負(fù)離子。后兩者可以選擇性地吸附于血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而使其著色;二是固定細(xì)胞形態(tài),加速染色反應(yīng),增強(qiáng)染色效果。
瑞氏染液染色原理:
瑞氏染色法使細(xì)胞著色既有化學(xué)親和反應(yīng),又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)的氧化物(天青)組成,其深于甲醇后,解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。各種細(xì)胞由于所含化學(xué)成分不同,對(duì)染料的親和力也不一樣,因此,染色后各種細(xì)胞呈現(xiàn)出各自的染色特點(diǎn)。
瑞氏染液配置方法:
瑞士染料830gm或1g;
甲醇(AR) 500ml或600ml;
先稱干燥(事先放入溫箱干燥過一夜)瑞氏染料放置乳缽內(nèi),用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細(xì)粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤,而無染料粉粒沉著。再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲(chǔ)存瓶內(nèi)(好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重復(fù)數(shù)次,至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。存室溫暗處,儲(chǔ)存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲(chǔ)存3個(gè)月以上為佳。
瑞氏染液使用說明:
1、取涂片、自然干燥。
2、滴加瑞氏染液染3分鐘,使標(biāo)本被其中甲醇所固定。
3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量超純水)輕輕晃動(dòng)玻片, 與瑞氏染色液混勻,靜置5分鐘。
4、水洗、吸干、鏡檢。
5、細(xì)菌染成藍(lán)色,組織細(xì)胞胞漿紅色,細(xì)胞核藍(lán)色。
注意事項(xiàng):
1、PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。由于細(xì)胞中各種蛋白均為兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液PH而定。對(duì)某一蛋白質(zhì)而言,如環(huán)境PH<PI(蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)),則該蛋白質(zhì)帶正電荷,即在酸性環(huán)境中正電荷增多,易與酸性伊紅結(jié)合,染色偏紅;相反,則易與美藍(lán)天青結(jié)合,染色偏藍(lán)。為此,應(yīng)使用清潔中性的玻璃片,稀釋液必須用PH6.4~6.8的確良緩沖液。沖洗玻片必須用流水。
2、未干透的血膜不能染色,否則染色時(shí)血膜易脫落。
3、染色時(shí)間與染液濃度、染色溫度成反比;而與細(xì)胞數(shù)量成正比。
4、沖洗時(shí)不能先倒掉染液,應(yīng)用流水沖去,以防染料沉淀在血膜上。
5、如血膜上有染料顆粒沉積,可加少許甲醇溶解,但需立即用水沖洗掉甲醇,以免脫色。
6、染色過淡,可以復(fù)染。復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液,創(chuàng)造良好的染色環(huán)境,而后加染液,或加染液與緩沖液的混合液,不可先加染液。
7、染色過深可用水沖洗或浸泡水中一定時(shí)間,也可用甲醇脫色。
8、染色偏酸或偏堿時(shí),均應(yīng)更換緩沖液再重染。
瑞氏染液為索萊寶常備貨產(chǎn)品,貨號(hào)為G1040。瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)(Methvlem blue)和酸性染料伊紅(Eostm Y)組成的復(fù)合染料,溶于甲醇 。在正常情況下,血膜外觀染成淡紫紅色。顯微鏡下,紅細(xì)胞呈粉紅色,在厚薄均勻處,略有碟狀感。白細(xì)胞漿中顆粒清楚,并顯示出各種細(xì)胞*的色彩。細(xì)胞核染紫紅色,核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。